目的 探讨SASH1基因对乳腺癌细胞增殖的作用及其与P53基因的关系.方法 购买134例乳腺癌组织芯片(上海芯超科技有限公司,芯片型号:HBre-Duc150Sur-01),用SASH1和p53抗体进行组织芯片免疫组织化学染色分析.构建重组质粒SASH1-PEGFP-C3(GFP-SASH1)、HA-p53-pcDNA3.0(HA-Tp53),定点突变SASH1基因上581、594、605、610位点(D581 V-SASH1、W594L-SASH1、F605S-SASH1、V610E-SASH1)和p53基因上175、248、273位点(R175H-p53、R248W-p53、R273H-p53).实验分组如下:(1)将0、0.5、1.0、2.0、4.0 μg的HA-Tp53单独转染或分别与2.0 μg的GFP-SASH1共同转染至HEK-293T细胞,用Western blot检测p53对GFP-SASH1和endo-SASH1表达的影响.(2)将0、0.5、1.0、2.0、4.0 μμg的GFP-SASH1单独转染或分别与2.0 μg的HA-Tp53共同转染至HEK-293T细胞,用定量RT-PCR检测p53 mRNA及蛋白表达.(3)2.0μg的HA-pcDNA3.0(空载体),野生型p53(wt-p53),突变型R175H-p53、R248W-p53、R273H-p53单独转染或分别与2.0μg的GFP-SASH1共同转染至HEK-293T细胞,用Western blot检测GFP-SASH1和endo-SASH1表达.(4)将2.0 μg的空载体,野生型-SASH1,突变型D581V-SASH1、W594L-SASH1、F605 S-SASH1、V610E-SASH1单独转染或与2.0 μg的HA-Tp53共同转染HEK-293

作者：邝中淑；曾兴；王萍；罗黄超；马江淑；陈梅；李艳；周定安；郑晓东

来源：中华乳腺病杂志（电子版） 2016 年 10卷 5期