目的 通过构建一种新型腺病毒载体,验证肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL基因)治疗胶质瘤的疗效,并证实新型载体的优势.方法 经美国华盛顿大学实验室授权获得Ad/35△E1-△E3,即E1和E3缺失的5型腺病毒纤维fiber被35型新型载体.利用基因重组,构建出重组腺病毒质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL.氯化铯密度梯度离心纯化Ad5/35△E1-△E3-TRAIL,并并测定病毒滴度.采用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光技术、蛋白质印迹法(Western blot)分别检测目的基因的表达.结果 纯化后Ad5/35△E1-△E3-TRAIL的病毒滴度为1.22×1015 pfu/l.重组质粒经RT-PCR都扩增出104 bp的基因片段.通过免疫荧光和Western blot等方法检测到目的基因的高效表达.结论 新型腺病毒载体质粒Ad5/35△E1-△E3-TRAIL能够高效的在脑胶质瘤细胞中表达.
作者：窦以河；何裕超；江水；刘世海；王衍刚；隋爱华；车树圣
来源：中华神经外科疾病研究杂志 2014 年 13卷 4期
