目的:制备表达人促红细胞生成素基因(hEPO)的重组腺病毒.方法:将hEPO基因亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带hEPO基因的重组腺病毒载体.获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装、扩增出重组腺病毒,氯化铯梯度离心法进行纯化,PCR和电镜负染鉴定重组腺病毒,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并检测重组腺病毒的滴度.继而用纯化的重组腺病毒感染HeLa细胞,测定转染效率,以Western blot检测hEPO蛋白的表达.结果:成功构建了携带hEPO基因的重组腺病毒载体pAd-hEPO,PCR、透射电镜和绿色荧光鉴定证实病毒包装成功,并且具有感染力,病毒的滴度可达1.8 × 10~(10) pfu/mL.Western blot检测表明RAd-hEPO感染的HeLa细胞中hEPO基因能够有效表达.结论:制备的BAd-hEPO可成功表达hEPO基因,为后续开展BAd-hEPO治疗缺血性心脏病的研究奠定基础.
作者：陈邦党；马依彤；马翔；杨毅宁；刘芬
来源：细胞与分子免疫学杂志 2010 年 26卷 3期
