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目的 探讨miR-195过表达对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响及其机制.方法 实验分为Blank组、NC组和miR-195组,Blank组处理时仅加等体积PBS,后两组通过脂质体将无义序列或miR-195模拟物转染至U251,RT-PCR检测转染前后miR-195表达水平;用CCK-8法计算细胞生长抑制率和平板克隆形成实验评价细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞凋亡和周期;Hoechst33342和PI双染法检测原位细胞凋亡坏死;利用生物信息学技术预测miR-195的靶基因,Western blot检测Bcl-2的蛋白水平.结果 RT-PCR测得转染后miR-195表达水平提高6倍左右;细胞生长抑制率和平板克隆形成结果分别显示过表达miR-195可以抑制U251生长和克隆形成能力(与NC组比较P<0.001);流式细胞仪检测细胞凋亡和Hoechst33342和PI双染法结果示miR-195组细胞凋亡和坏死比例明显增高(与Blank组及NC组相比P<0.001);流式细胞仪检测细胞周期发现miR-195能够阻滞U251在Go/G1期,与Blank组及NC组相比P<0.05;TargetScan预测发现Bcl-2是miR-195的靶基因;Western blot检测示过表达miR-195可以下调Bcl -2的表达,与Blank组及NC组相比P<0.05.结论 过表达miR-195可以抑制胶质瘤细胞U251的增殖,促进胶质瘤细胞凋亡和坏死并产生Go/G1期阻滞,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶

作者:王宏勤;王新星;苗旺;刘晓东;慕伟;郭庚;范益民

来源:中华神经外科杂志 2013 年 29卷 5期

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作者:
王宏勤;王新星;苗旺;刘晓东;慕伟;郭庚;范益民
来源:
中华神经外科杂志 2013 年 29卷 5期
标签:
神经胶质瘤 MiR-195 增殖 凋亡 Bcl-2 Glioma MiR-195 Proliferation Apoptosis Bcl-2
目的 探讨miR-195过表达对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响及其机制.方法 实验分为Blank组、NC组和miR-195组,Blank组处理时仅加等体积PBS,后两组通过脂质体将无义序列或miR-195模拟物转染至U251,RT-PCR检测转染前后miR-195表达水平;用CCK-8法计算细胞生长抑制率和平板克隆形成实验评价细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞凋亡和周期;Hoechst33342和PI双染法检测原位细胞凋亡坏死;利用生物信息学技术预测miR-195的靶基因,Western blot检测Bcl-2的蛋白水平.结果 RT-PCR测得转染后miR-195表达水平提高6倍左右;细胞生长抑制率和平板克隆形成结果分别显示过表达miR-195可以抑制U251生长和克隆形成能力(与NC组比较P<0.001);流式细胞仪检测细胞凋亡和Hoechst33342和PI双染法结果示miR-195组细胞凋亡和坏死比例明显增高(与Blank组及NC组相比P<0.001);流式细胞仪检测细胞周期发现miR-195能够阻滞U251在Go/G1期,与Blank组及NC组相比P<0.05;TargetScan预测发现Bcl-2是miR-195的靶基因;Western blot检测示过表达miR-195可以下调Bcl -2的表达,与Blank组及NC组相比P<0.05.结论 过表达miR-195可以抑制胶质瘤细胞U251的增殖,促进胶质瘤细胞凋亡和坏死并产生Go/G1期阻滞,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶