目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化中的作用.方法 取培养至少4代以上的大鼠MSCs,分为无血清培养基对照组(A组)、法舒地尔组(B组)及法舒地尔+脂多糖组(C组);A组只加无血清DMEM培养基,B组加诱导液(含终浓度200 μmol/L法舒地尔的DMEM培养基900 μL+10%胎牛血清100 μL),C组加诱导液(含终浓度200 μmol/L法舒地尔和1000μg/L脂多糖的DMEM培养基900 μL+10%胎牛血清100 μL);分别诱导6h.随后采用倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化,采用细胞荧光免疫组化法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元微管结合蛋白(MAP-2)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,采用实时定量PCR(RT-PCR)检测cyclin D1 mRNA及MAP-2 mRNA的表达,采用Westem blotting检测3组细胞cyclin D1及MAP-2蛋白的表达.结果 (1)A组MSCs基本保持扁平、突起稀少,B组及C组可见神经元样细胞明显增多,形成典型神经网络.其中B组MSCs向神经元分化速度快,C组MSCs向神经元分化速度较慢,神经元网络较B组稀少.(2)荧光免疫组化结果显示,与A组比较,B组及C组NSE与MAP-2表达量均明显增加,cyclin D1表达均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05).3组细胞的GFAP表达率均小于1
作者:赵二义;贾延劼;王带媚;文国强;景黎君;邓益东;郭敏
来源:中华神经医学杂志 2015 年 14卷 9期