目的 探讨TEa5 (p35的一个裂解片段)特异性抑制细胞周期蛋白依赖蛋白激酶5(CDK5)/p25活力后在1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡过程中的保护作用及其机制. 方法 使用100 μg/Lβ神经生长因子将体外常规培养的PCI2细胞诱导分化为多巴胺能神经元,加入不同浓度MPP+(0、100、200、300、400、600、800、1000μmol/L)处理,应用CCK8法检测细胞活力,以明确MPp+诱导PC12细胞凋亡的合适浓度.将诱导分化后的PC12细胞分为4组:PBS+ PBS组、MPP++ PBS组、MPP++ TFP5组和MPP++ CDK5抑制剂Roscovitine组;TFP5与Roscovitne提前12h加入培养基中预处理(终浓度分别为100 nmol/L、10 nmol/L).分别应用流式细胞仪及Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况,应用Western blotting检测细胞中p35/p25、半胱氨酸蛋白酶-3、裂解半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达水平. 结果 CCK8法检测结果显示:Mpp+浓度为300 μmol/L时,PC12细胞的存活率为(64.84±1.58)％.流式细胞仪检测结果显示:MPP++PBS组细胞凋亡率[(25.61±2.74)％]最高,MPP++TFP5组细胞凋亡率[(13.33±1.24)％]较低,比较差异有统计学意义(P＜0.05).Hoechst33258染色结果显示:MPP++PBS组细胞核固缩及碎裂最明显,较多凋亡小体形成,而MPP++ TFP5组与MPP++ Roscovitine组仅有少量凋亡

作者：贺荣霓；黄曜纬；颜振兴；黄伟；胡亚芳；谢惠芳

来源：中华神经医学杂志 2016 年 15卷 3期