目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K/Akt)通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用。方法(1)常规培养人血管内皮细胞株EA.hy926细胞,取部分人血管内皮细胞株EA.hy926按照随机数字表法分为两组:正常对照组:置于气体成分体积分数5%二氧化碳培养箱中常规培养;缺氧组:置于气体成分体积分数1%氧气、5%二氧化碳和94%氮气的三气培养箱中进行缺氧培养。采用蛋白质印迹法检测正常对照组内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞中Akt活化状态(以pAkt/Akt值表示),流式细胞仪检测细胞凋亡率。(2)另取部分人血管内皮细胞株EA.hy926按照随机数字表法分为4组:正常对照组,缺氧组:培养方法同前,正常对照+阻断剂组:用含50μmol/L的LY294002(PI3 K/Akt阻断剂)的培养液常规培养内皮细胞;缺氧+阻断剂组:用含50μmol/L 的LY294002的培养液缺氧处理内皮细胞。均于培养3 h后收集内皮细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。对Akt活化状态与细胞凋亡率行单因素方差分析和LSD-t检验。结果(1)正常对照组细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞pAkt/Akt值分别为0.67、0.79、0.34和0.35;正常内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h 的内皮细胞凋亡率分别为(3.11±0.21)%、(4.57±0.85)%
作者:阮琼芳;陈斓;赵超莉;叶子青;谢琼慧;谢卫国
来源:中华损伤与修复杂志(电子版) 2014 年 6期