目的 建立人血管内皮生长因子165(VEGF 165)基因转染人骨髓间充质干细胞(MSC)的有效方法.方法 体外分离培养MSC,设转染组:采用脂质体介导法将pShuttle-CMV/VEGF 165质粒转染至MSC,空质粒组:转染pShuttle-CMV载体作对照,脂质体组:转染脂质体作对照,对照组:常规培养.用RT-PCR、酶联免疫吸附测定法和蛋白质印迹法检测MSC mRNA及其蛋白的表达情况,用噻唑蓝法检测MSC对VEGF质粒转染的敏感性. 结果转染组、空质粒组、脂质体组和对照组VEGF 165基因mRNA表达量分别为0.89±0.03、0.34±0.04、0.40±0.03、0.30±0.03,转染组与后3组比较,差异有统计学意义(P<0.01);各组细胞培养上清液中VEGF 165蛋白含量依次为(778±35)、(543±24)、(561±28)、(571±23)pg/mL,与后3组比较,转染组差异有统计学意义(P<0.01),转染后第7天表达至高峰,以后逐渐降低.转染组MSC中VEGF165蛋白表达电泳条带强度明显强于其他3组(P<0.01),VEGF质粒转染对MSC增殖活性无影响.结论 本研究建立了VEGF 165基因对MSC的转染方法,能有效表达目的基因及其蛋白.
作者：张向荣；刘德伍；郭光华；彭燕；钟清玲
来源：中华烧伤杂志 2009 年 25卷 4期
