目的 观察腺病毒介导的人EGF(Ad-hEGF)基因转染人表皮细胞的合适条件及转染对该细胞生物学特性的影响. 方法 取包皮环切术后弃用的新鲜人体包皮组织,通过酶消化法分离人表皮细胞,传代培养,采用第3代细胞进行以下实验.(1)按随机数字表法(分组方法下同)将细胞分为未转染组及5、20、50、100、150、200倍转染组,每组3孔.未转染组不转染Ad-hEGF基因,后6组分别按感染复数(MOI)5、20、50、100、150、200转染Ad-hEGF基因.转染24、48、72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态,倒置荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达.(2)另取3个批次细胞,分别同前分组处理,分别于转染24、48、72 h,流式细胞仪检测Ad-hEGF基因转染率(样本数为3),ELISA法检测收集的细胞培养上清液中EGF质量浓度(样本数为6),细胞计数试剂盒8(CCK8)及酶标仪检测细胞增殖活性(样本数为6).(3)另取细胞分为未转染组和转染组,每组6 孔.未转染组用未转染细胞的细胞培养上清液孵育,转染组用以最佳MOI(50)转染Ad-hEGF基因细胞的细胞培养上清液孵育,分别于孵育1、3、5 d,CCK8及酶标仪检测细胞分泌的EGF生物活性.(4)另取细胞分为未转染组和转染组,每组12孔.未转染组不转染Ad-hEGF基因,转染组以最佳MOI(50)转染Ad-hEGF基因.转染24 h,免疫荧光染色法检测细胞角蛋白1
作者：尹凯；马丽；申传安；尚玉茹；李大伟；李龙珠；赵东旭；程文凤
来源：中华烧伤杂志 2016 年 32卷 5期
