目的观察RNA干扰(RNAi)技术能否有效抑制大肠癌LoVo细胞株表皮生长因子受体(EGFR)的表达以及对细胞增殖的影响.方法构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2;脂质体瞬时转染后24、48、72、96、144 h实时荧光定量PCR(Real Time PCR)和Western blot检测EGFR表达,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,并绘制细胞生长曲线;分5组:A组:LoVo细胞组;B组:Lipofectamine2000组;C组:对照载体HK组;D组:pU6-EGFR-shRNA-1组;E组:pU6-EGFR-shRNA-2组.结果D组E组细胞转染shRNA后mRNA和蛋白表达降低,G0～G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,对数生长期延迟,以48 h效果最显著,和A组B组C组比较差异有统计学意义(P＜0.05);但随着时间的推移其干扰作用降低.结论两条EGFR-shRNA均可有效抑制大肠癌LoVo细胞EGFR表达,阻滞更多的细胞位于G0～G1期,促进细胞凋亡而抑制细胞增殖.
作者：陶凯雄；吴相柏；王国斌；陈道达；张宁；李新明
来源：中华实验外科杂志 2006 年 23卷 7期
