目的 根据基因库中的人肝素酶基因序列,构建针对肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染MDA-MB-231细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用.方法 设计HPSE靶向的发夹状siBNA,退火后连接人pGPU6/GFP/Neo载体,转化后进行序列鉴定,脂质体转染MDA-MB-231细胞株,并进行荧光摄像,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的生长抑制率.结果 设计出3条针对HPSE的siRNA,将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGPU6/GFP/Neo载体,测序结果正确.转染MDA-MB-231细胞后,MTT法显示重组质粒转染组乳腺癌细胞的生长均受到了抑制,抑制率分别为58.25±3.42、43.70±2.44、39.40±2.38,比较空白对照组4.48±2.28明显升高(P＜0.05).结论 成功构建针对HPSE基因的siRNA载体,转染MDA-MB-231细胞后,细胞的增殖能力减弱.
作者：陈少全；刘启志；宋京翔；王冰；王烈
来源：中华实验外科杂志 2010 年 27卷 3期
