目的 构建DJ-1 shRNA真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人肝癌HepG2细胞株.方法 合成DJ-1基因干扰序列,定向插入真核表达载体pGenesil-1质粒并测序鉴定;干扰质粒经脂质体介导转染人肝癌HepG2细胞,G418(450 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定转染的细胞株;荧光显微镜观察转染扩增效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测稳定转染细胞株的DJ-1 mRNA和蛋白的表达.结果 测序证明DJ-1干扰序列及读码框完全正确,G418筛选后扩增细胞中稳定转染扩增百分率高达75.00
作者：刘顺芳；刘谨文；易继林；杨志芳；殷茜；李兴睿
来源：中华实验外科杂志 2011 年 28卷 8期
