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目的 观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胃癌发生、发展中的作用;构建MMP-9基因沉默质粒;建立MMP-9基因沉默的BGC823细胞.方法 采用免疫组织化学法在46例人胃癌新鲜标本中检测MMP-9的蛋白表达水平,采用化学合成的方法合成3条沉默MMP-9的寡聚核苷酸序列,插入到短发卡RNA (shRNA)表达载体pGenesil上,运用荧光显微镜、明胶酶电泳、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3条质粒的沉默效率;选取沉默效率最佳的1个质粒转染BGC823进行稳定细胞株的筛选及鉴定.结果 46例胃癌组织MMP-9蛋白阳性率为100%,其中57%(26/46)呈增强表达;筛选到1条MMP-9沉默最为显著的shRNA表达质粒;成功构建MMP-9基因沉默的BGC823胃癌细胞克隆.结论 MMP-9基因在胃癌发生、发展及浸润、转移过程中可能扮演重要角色.

作者:刘凯华;黄卫锋;黄安乐;蔡建春

来源:中华实验外科杂志 2012 年 29卷 10期

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作者:
刘凯华;黄卫锋;黄安乐;蔡建春
来源:
中华实验外科杂志 2012 年 29卷 10期
标签:
基质金属蛋白酶-9 RNA干扰 胃肿瘤 Matrix metalloproteinase-9 RNA interference Stomach neoplasm
目的 观察基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在胃癌发生、发展中的作用;构建MMP-9基因沉默质粒;建立MMP-9基因沉默的BGC823细胞.方法 采用免疫组织化学法在46例人胃癌新鲜标本中检测MMP-9的蛋白表达水平,采用化学合成的方法合成3条沉默MMP-9的寡聚核苷酸序列,插入到短发卡RNA (shRNA)表达载体pGenesil上,运用荧光显微镜、明胶酶电泳、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3条质粒的沉默效率;选取沉默效率最佳的1个质粒转染BGC823进行稳定细胞株的筛选及鉴定.结果 46例胃癌组织MMP-9蛋白阳性率为100%,其中57%(26/46)呈增强表达;筛选到1条MMP-9沉默最为显著的shRNA表达质粒;成功构建MMP-9基因沉默的BGC823胃癌细胞克隆.结论 MMP-9基因在胃癌发生、发展及浸润、转移过程中可能扮演重要角色.