目的 观察靶向抑制表皮生长因子受体(EGFR)对人胰腺癌细胞(PANC-1)上皮-间质转化(EMT)过程的影响,探讨其机制.方法 设计并合成针对EGFR基因特异的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默人胰腺癌PANC-1细胞EGFR基因表达.应用划痕试验及基质胶侵袭试验检测EGFR干扰后细胞运动、侵袭能力的变化；应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测转染后EMT相关标志物E-钙粘蛋白(E-Cadherin)、N-钙粘蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)等的表达变化,并检测EMT相关转录因子的表达变化；应用细胞免疫荧光共聚焦显微镜检测上述蛋白的定位及细胞形态的变化.结果 应用慢病毒介导的RNA干扰技术可特异性抑制人胰腺癌PANC-1细胞EGFR基因的表达.抑制EGFR后PANC-1细胞的运动及侵袭能力显著降低；上皮表型标志物E-Cadherin表达明显上调,间质表型N-Cadherin、Vimentin、Fibronectin等的表达显著下调；与对照组比较,EGFR干扰组细胞由纺锤形变成立方形,伪足消失；EGFR干扰组中EMT相关转录因子Snail及Slug表达显著下调.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默EGFR基因的表达,可显著抑制PANC-1细胞的EMT过程,其机制可能与下调转录因子Snail及Slug表达有关.
作者：常志刚；韦军民；秦昌富；郝昆；田孝东；谢昆；谢学海；杨尹默
来源：中华实验外科杂志 2013 年 30卷 1期
