目的 探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)对脂多糖(LPS)激活的大鼠巨噬细胞凋亡的影响及其机制.方法 自SD大鼠腹腔提取巨噬细胞,鉴定并判断其活力;LPS(1 mgL)刺激大鼠巨噬细胞建立体外炎症模型;设空白对照组、LPS组及不同浓度的LPS+ 5-Fu组,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,并测定半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活性,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法测定B淋巴细胞/白血病-2(bcl.2)、bax及p53基因表达的改变,Westem blot测定bcl-2、bax、p-Caspase-3及p53/p-p53蛋白表达的变化.结果 大鼠腹腔成功提取巨噬细胞;CCK-8结果显示5-Fu能促进LPS激活的巨噬细胞凋亡(0.749±0.011、0.694±0.009、0.549±0.009、0.525±0.010、0.441±0.014、0.336±0.012比1.036±0.47,P<0.05);Hoechst染色也观察到LPS+5-Fu组巨噬细胞凋亡显著增加;LPS+ 5-Fu组Caspase-3活性强于LPS组(12.29±0.34、12.75±0.44、15.25±0.58、17.01±0.54比10.92 ±0.24,P <0.05);LPS +5-Fu组bcl-2 mRNA的表达显著低于LPS组,且呈剂量依赖性关系(1.99±0.11、1.14 ±0.11、0.76±0.04、0.37±0.05比4.14±0.27,P<0.05),bax及p53 mRNA的表达则显著高于LPS组,亦呈剂量依赖性关系(38.32±1.70、63.24±4.82、7
作者:王维明;周香;孙洪伟;陈必成;周蒙滔
来源:中华实验外科杂志 2013 年 30卷 2期