目的 观察针对人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA (shRNA)质粒表达载体对乳腺癌T47D细胞端粒酶活性及增殖能力的影响.方法 将针对hTERT的5种shRNA质粒表达载 体并转染到乳腺癌T47D细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测hTERT在mRNA和蛋白水平上的表达;抗酒石酸酸性磷酸酶-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)法检测细胞的端粒酶活性变化;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪结合碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期分布.结果 同对照组T47D细胞比较,小干扰RNA(siRNA)1组和阴性对照siRNA2-N组hTERT基因在mRNA和蛋白水平的表达以及细胞端粒酶活性的变化差异无统计学意义(P>0.05),而siRNA2组分别下降57.1%、57.0%和57.0(P<0.01),siRNA3组分别下降53.7%、53.4%和56.5% (P<0.01),siRNA4组分别下降70.0%、70.3%和81.9% (P<0.01);siRNA1、siRNA2-N组细胞生长速度及各期细胞比例差异无统计学意义(P>0.05),而siRNA2、siRNA3和siRNA4组细胞自24h起就出现生长速度明显降低(P<0.01),G0/G1期细胞比例增高(P<0.01)和S期细胞比例降低(P<0.01).结论 针对hTERT的shRNA可抑制肿瘤细胞的增殖.
作者:胡凡果;只向成;史玉荣;牛瑞芳;刘彤
来源:中华实验外科杂志 2013 年 30卷 4期