目的 观察利用psiSTRIKETM/葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和psiSTRIKETM/GRP94抑制人类胃癌细胞株SGC-7901 GRP78和GRt94基因表达对胃癌细胞活性及凋亡的影响.方法 构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,采用LipofectamineTM 2000转染试剂进行共转染,将psiSTRIKETM/GRP78和psiSTRIKETM/GRP94同时导入胃癌细胞内,在转染前及转染后72 h通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、间接法免疫荧光技术检测GRP78和GRP94 mRNA及蛋白水平的表达,并设立阴性对照组(只加入转染试剂)比较.设立3组:实验组(共转染组)、阴性对照组(只加入转染试剂)及空白对照组(未加任何处理),在转染72 h后用噻唑蓝(MTT)法检测胃癌细胞活性,流式细胞仪检测胃癌细胞早期凋亡.结果 成功将psiSTRIKETM/GRP78和psiSTRIKETM/GRP94转染至SGC-7901 72 h后,与2个对照组比较,GRP78相对表达量为0.49,GRP94为0.40,与对照组比较的表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).MTT结果显示:在转染后48 h及72 h,与2个对照组比较,实验组胃癌细胞生长受到抑制;转染后72 h,实验组具有21.98%的凋亡率,与空白对照组和阴性对照组比较细胞凋亡显著增多,而阴性对照组(6.04%)与空白对照组(1.05%)比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在体外同时转染psiSTRIKETM/GR
作者:张新晨;杨维良;徐华锋;王书;吴德全
来源:中华实验外科杂志 2013 年 30卷 4期