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目的 观察转录因子叉头框蛋白Q1(FOXQl)基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制.方法 构建针对FOXQ1基因的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,脂质体Lipofactamine 2000介导FOXQ1干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞;转染48 h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测FOXQ1、上皮间质标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达改变;细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力;噻唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用.结果 与转染NC-shRNA阴性对照组比较,转染FOXQ1-shRNA 48 h后的T24细胞,FOXQ1和间质标记基因N-Cadherin、Vimentin的mRNA或蛋白表达下降,而上皮标记基因E-cadherin的mRNA或蛋白表达显著增加;转染后的T24细胞形态向正常上皮细胞转化,体外迁移能力与侵袭力下降[(15.4±1.4)%比(76.5±1.1)%,P<0.05];细胞增殖明显抑制(57.8%比82.7%,P<0.05),同时细胞凋亡率增加(37.6%比14.2%,P<0.05).结论 靶向沉默FOXQ1基因可以逆转肿瘤细胞的间质表型向正常上皮表型转化,抑制癌细胞迁移和侵袭,降低肿瘤转移潜能.

作者:朱智能;朱朝辉;庞自力;兰东阳;王海鹏

来源:中华实验外科杂志 2013 年 30卷 4期

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作者:
朱智能;朱朝辉;庞自力;兰东阳;王海鹏
来源:
中华实验外科杂志 2013 年 30卷 4期
标签:
上皮间质转化 转录因子叉头框蛋白Q1 膀胱癌 RNA干扰 Epithelial mesenchymal transition Transcription factor forkhead box protein Q1 Bladder cancer RNA interference
目的 观察转录因子叉头框蛋白Q1(FOXQl)基因沉默对膀胱癌T24细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其促进肿瘤侵袭转移的作用机制.方法 构建针对FOXQ1基因的短发卡RNA(shRNA)真核表达载体,脂质体Lipofactamine 2000介导FOXQ1干扰质粒转染人膀胱癌细胞株T24细胞;转染48 h后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测FOXQ1、上皮间质标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达改变;细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测体外细胞迁移和侵袭能力;噻唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法检测shRNA对细胞增殖和凋亡的作用.结果 与转染NC-shRNA阴性对照组比较,转染FOXQ1-shRNA 48 h后的T24细胞,FOXQ1和间质标记基因N-Cadherin、Vimentin的mRNA或蛋白表达下降,而上皮标记基因E-cadherin的mRNA或蛋白表达显著增加;转染后的T24细胞形态向正常上皮细胞转化,体外迁移能力与侵袭力下降[(15.4±1.4)%比(76.5±1.1)%,P<0.05];细胞增殖明显抑制(57.8%比82.7%,P<0.05),同时细胞凋亡率增加(37.6%比14.2%,P<0.05).结论 靶向沉默FOXQ1基因可以逆转肿瘤细胞的间质表型向正常上皮表型转化,抑制癌细胞迁移和侵袭,降低肿瘤转移潜能.