目的 观察KRAB-相关蛋白1(KAP-1)对胰腺癌Capan-2细胞株化疗耐药的影响.方法 PCR扩增KAP-1序列,克隆至pGC-FU-3 FLAG-IRES-Puromycin慢病毒表达载体；双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装并进行滴度检测.构建成功后感染人胰腺癌细胞株Capan-2细胞,48 h后使用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)以及Westem blot法检测KAP-1的表达量及其相关上皮-间充质转化(EMT)标志蛋白——波形蛋白的表达.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)方法测定不同化疗药物在不同浓度下过表达KAP-1的Capan-2细胞生长及化疗药物对胰腺癌细胞的生长抑制作用.结果 构建的慢病毒载体感染细胞48 h后,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光,病毒滴度为2×108 TU/ml.RT-qPCR检测结果表明,实验组、阴性对照组、空白对照组细胞中KAP-1的mRNA相对表达量分别为9.48±0.73、0.03±0.00、0.02±0.00,差异有统计学意义(P＜0.05)；波形蛋白的mRNA相对表达量分别为7.84±0.21、0.63 ±0.07、0.59±0.12,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果表明:实验组、阴性对照组、空白对照组细胞中KAP-1的蛋白相对表达量分别为2.73±0.97、0.63±0.36、0.51±0.14,差异有统计学意义(P＜0.05)；波形蛋白的相对表达量为4.75±0.53、1.00±0.26、1.25±0.91,

作者：詹磊；江建新；潘耀振；孙诚谊

来源：中华实验外科杂志 2014 年 31卷 1期