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目的 探讨小RNA干扰技术(siRNA)沉默猫肉瘤相关蛋白(Fer)的表达对前列腺癌细胞周期及凋亡的影响及其机制.方法 设计合成3组针对Fer特异的siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测转染前后PC-3细胞中Fer mRNA及蛋白表达水平,并筛选出干扰效率最高的小干扰RNA进行后续实验,用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期变化并分析细胞凋亡,观察Fer基因表达抑制后细胞周期及凋亡相关基因表达水平的变化.结果 利用RT-qPCR检测siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3组的Fer mRNA相对表达量分别为0.288、0.369、0.623,与阴性对照(NC)组比较差异均具有统计学意义(以NC组FermRNA表达量为l,P<0.05),Western blot方法同样证实3组小RNA干扰组显著抑制PC-3细胞的Fer蛋白的表达,其中siRNA-1干扰效率最高(P<0.01).流式细胞仪结果显示RNA干扰(Si)组细胞G0/G1期细胞比例为(52.340±2.049)%,显著高于NC组(40.230±2.065)%,而在S期细胞比例为(35.040 ±3.810)%,显著低于NC组(50.650±3.693)%,两者与NC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);Si组细胞的凋亡率为(33.6±3.3)%,显著高于NC组的凋亡率(7.8±1.0)%,差异有统计学意义(P<0.05);同时随着Fer表达的抑制,细胞周期素(Cyclin) D1,B

作者:胡旭东;于德新;张志强;谢栋栋;王毅;张涛

来源:中华实验外科杂志 2015 年 32卷 6期

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作者:
胡旭东;于德新;张志强;谢栋栋;王毅;张涛
来源:
中华实验外科杂志 2015 年 32卷 6期
标签:
前列腺癌 猫肉瘤相关蛋白 小干扰RNA 细胞周期 脱噬作用 Prostate cancer Feline sarcoma-related protein Small interfering RNA Cell cycle Apoptosis
目的 探讨小RNA干扰技术(siRNA)沉默猫肉瘤相关蛋白(Fer)的表达对前列腺癌细胞周期及凋亡的影响及其机制.方法 设计合成3组针对Fer特异的siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot法检测转染前后PC-3细胞中Fer mRNA及蛋白表达水平,并筛选出干扰效率最高的小干扰RNA进行后续实验,用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期变化并分析细胞凋亡,观察Fer基因表达抑制后细胞周期及凋亡相关基因表达水平的变化.结果 利用RT-qPCR检测siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3组的Fer mRNA相对表达量分别为0.288、0.369、0.623,与阴性对照(NC)组比较差异均具有统计学意义(以NC组FermRNA表达量为l,P<0.05),Western blot方法同样证实3组小RNA干扰组显著抑制PC-3细胞的Fer蛋白的表达,其中siRNA-1干扰效率最高(P<0.01).流式细胞仪结果显示RNA干扰(Si)组细胞G0/G1期细胞比例为(52.340±2.049)%,显著高于NC组(40.230±2.065)%,而在S期细胞比例为(35.040 ±3.810)%,显著低于NC组(50.650±3.693)%,两者与NC组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);Si组细胞的凋亡率为(33.6±3.3)%,显著高于NC组的凋亡率(7.8±1.0)%,差异有统计学意义(P<0.05);同时随着Fer表达的抑制,细胞周期素(Cyclin) D1,B