目的 通过RNA免疫共沉淀寻找长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录体1(NEAT1)相关的RNA结合蛋白,验证这些RNA结合蛋白参与NEAT1调节肝癌相关基因核内不均一核糖核蛋白A2(hnRNPA2)表达的分子机制,观察NEAT1调节hnRNP A2的表达对人肝细胞癌的进展的影响.方法 查询Starbase 2.0数据,寻找与NEAT1相互作用密切的RNA结合蛋白,通过RNA免疫共沉淀明确能同时与NEAT1和NEAT1所调控基因mRNA相互作用的RNA结合蛋白,RNA pull-down明确RNA结合蛋白与NEAT1作用靶点片段,使用转染试剂Lipofectamine 2000和siRNA NEAT1(终质量浓度100 nmol/L)敲低HepG2细胞NEAT1表达,Western blot、免疫组织化学检测NEAT1对hnRNP A2蛋白的调节,使用逆转录病毒STP-重组逆转录病毒载体作为载体建立hnRNP A2过表达模型并应用于NEAT1低表达的HepG2细胞模型中,细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验(10 μl/2 000个细胞)和Transwell小室研究NEAT1低表达的HepG2细胞(2×105个/孔)过表达hnRNP A2后与对照组的增殖、侵袭功能.HepG2经NEAT1敲低后2×106/0.2 ml腋下注射建立裸鼠皮下成瘤模型,与对照组(si-NC)比较肿瘤体积,hnRNP A2表达.结果 U2AF65能够与NEAT1和hnRNP A2 mRNA相互作用(富集度分别为IgG的82.659倍和53.527倍),NEAT1敲低降低了hnRNP A2 mRNA转录和

作者：莽源祎；李立；冉江华；张升宁；刘静；李来邦；陈奕明；刘剑；高杨

来源：中华实验外科杂志 2016 年 33卷 11期