目的 通过RNA干扰技术,特异沉默精子相关抗原9(SPAG9)基因的表达,观察其对前列腺癌PC-3细胞的影响,并探讨其机制.方法 构建SPAG9基因特异性短发卡RNA(shRNA)表达载体pGPU6-绿色荧光蛋白(GFP)-SPAG9,用Lipofectamine 2000 将pGPU6-GFP-SPAG9转染人前列腺癌PC-3细胞,以空质粒pGPU6-GFP及未转染的细胞作对照.转染后48h,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SPAG9 mRNA表达,Western blot检测SPAG9蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测特异沉默SPAG9后PC-3细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、血管内皮生长因子(VEGF)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,进一步分析特异沉默SPAG9基因对前列腺癌PC-3影响的可能机制.结果 酶切及测序结果表明质粒 pGPU6-GFP-SPAG9构建成功.转染pGPU6-GFP-SPAG9 48h 后,PC-3细胞SPAG9 mRNA、蛋白表达水平分别为1.96±0.16和0.39±0.05,显著低于空载体组(3.23±0.18和1.13±0.04)及空白对照组(3.08±0.12和1.25±0.05),与空白对照组、空载体转染组比较,差异有统计学意义(P=0.000);CCK-8结果表明:转染48h后,pGPU6-GFP-SPAG9组细胞吸光度(A)值为31.9±2.6,与空白对照组(48.1±2.8,P=0.016)、空

作者：毛立军；丁猛；徐凯；曹航；刘宁；陈家存

来源：中华实验外科杂志 2017 年 34卷 4期