目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-135a通过Notch通路调控小儿肝母细胞瘤细胞增殖和增殖的影响.方法 将传代的肝母细胞瘤细胞分为两组:A组:PEF miR-135a和PSV2neo共转染组,B组:PEE和PSV2neo共转染组,取正常小儿肝脏细胞作为C组.A组为实验组,B、C两组为阳性对照组和阴性对照组.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-135a在两组肝母细胞瘤细胞中的表达,采用流式细胞法检测过表达的miR-135a对肝母细胞瘤细胞凋亡的影响,利用噻唑蓝(MTT)法及碱性磷酸酶(ALP)法检测观察两组细胞的增殖和增殖,Western blot检测两组细胞中Jagged1和Notch1蛋白的表达水平.结果 Real-time PCR显示miR-135a在肝母细胞瘤细胞中的表达较正常小儿肝脏细胞明显下调(P=0.009);成功构建PEF-miR-135a真核表达载体,Real-time PCR显示:A组细胞miR-135a的表达明显上调(P =0.003).膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)检测显示miR-135a过表达能够显著抑制肝母细胞瘤细胞的凋亡率(P=0.030).Western blot检测显示miR-135a过表达可以显著下调Jagged1和Notch1蛋白的表达水平.结论 miR-135a过表达可能通过下调Notch通路的表达来抑制小儿肝母细胞瘤细胞的增殖.
作者：陈志平；潘群雄
来源：中华实验外科杂志 2017 年 34卷 11期
