目的 观察G蛋白偶联受体30(GPR30)激动剂G-1抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的活化白细胞介素-1β(IL-1β)成熟的作用.方法 提取C57BL/6小鼠腹腔巨噬细胞,使用10、30、50 μmol/L G-1预处理巨噬细胞,经50 ng/ml脂多糖(LPS)诱导后,收集巨噬细胞,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)和IL-1β mRNA的表达量,Western blot法检测NLRP3、ASC、pro-Caspase-1蛋白的表达.使用1、5、15、30、50 μmol/L浓度梯度G-1预处理巨噬细胞,50 ng/ml LPS和5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)诱导细胞后,收集培养基上清,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-1 β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 G-1预处理巨噬细胞,LPS诱导后NLRP3、ASC和IL-1β mRNA表达量与LPS组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).NLRP3、ASC和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶前体(pro-Caspase-1)蛋白表达量与LPS组比较差异无统计学意义(P>0.05).ELISA结果显示,随着G-1浓度升高,与LPS+ATP组(2714.73±107.05)比较,IL-1β含量(3062.42±12.10、1 709.29±25.31、653.27±35.66、144.23±4.18、98.40±2.02)呈梯度性降低,G-1浓度≥5μmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05).TNF-α含量(361.93±10.66、394.62±20.4
作者:付强;秦涛;胡明星;王玉柱;刘传江;张旭;翟振胜;夏鹏;张宏伟
来源:中华实验外科杂志 2019 年 36卷 3期