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目的 观察自噬在小剂量衣霉素(TM)诱导内质网应激(ERS)预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用.方法 使用数字表法将50只成年雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R+衣霉素处理组(TM组,模型建立前30 min腹腔注射TM)、I/R+ TM处理+3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理1组(3-MA-1组,模型建立前30 min腹腔注射TM、静脉注射自噬抑制剂3-MA);I/R+衣霉素处理+3-MA处理2组(3-MA-2组,模型建立前30 min腹腔注射TM、再灌注时静脉注射3-MA);各组TM按0.6 mg/kg体重、3-MA按1 mg/kg体重给药.使用结扎左冠状动脉前降支并再灌注的方法建立I/R模型.在开胸后、再灌注2h时通过颈动脉取血,比色法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;再灌注2h后处死动物摘出心脏,原位缺口末端标记法(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测自噬蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-I表达.使用方差分析比较各组CK-MB、LDH、细胞凋亡及自噬蛋白的表达.结果 CK-MB、LDH活性在再灌注2h时,TM组较I/R组低,差异有统计学意义(t=2.672、2.834,P<0.05);3-MA-1组与I/R组比较差异无统计学意义(t=1.232、1.275,P>0.05).Sham、I/R、TM、3-MA-1和3-MA-2组细胞凋亡指数依次为(2.5±0.3)%

作者:高鲁方;周涛;杨列红;冯超;李遂宁;向道康;厉忠逵

来源:中华实验外科杂志 2019 年 36卷 6期

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作者:
高鲁方;周涛;杨列红;冯超;李遂宁;向道康;厉忠逵
来源:
中华实验外科杂志 2019 年 36卷 6期
标签:
心肌缺血再灌注损伤 内质网应激 预处理 衣霉素 自噬 Myocardial ischemia reperfusion injury Endoplasmic reticulum stress Preconditioning Tunicamycin Autophagy
目的 观察自噬在小剂量衣霉素(TM)诱导内质网应激(ERS)预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用.方法 使用数字表法将50只成年雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R+衣霉素处理组(TM组,模型建立前30 min腹腔注射TM)、I/R+ TM处理+3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理1组(3-MA-1组,模型建立前30 min腹腔注射TM、静脉注射自噬抑制剂3-MA);I/R+衣霉素处理+3-MA处理2组(3-MA-2组,模型建立前30 min腹腔注射TM、再灌注时静脉注射3-MA);各组TM按0.6 mg/kg体重、3-MA按1 mg/kg体重给药.使用结扎左冠状动脉前降支并再灌注的方法建立I/R模型.在开胸后、再灌注2h时通过颈动脉取血,比色法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;再灌注2h后处死动物摘出心脏,原位缺口末端标记法(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测自噬蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-I表达.使用方差分析比较各组CK-MB、LDH、细胞凋亡及自噬蛋白的表达.结果 CK-MB、LDH活性在再灌注2h时,TM组较I/R组低,差异有统计学意义(t=2.672、2.834,P<0.05);3-MA-1组与I/R组比较差异无统计学意义(t=1.232、1.275,P>0.05).Sham、I/R、TM、3-MA-1和3-MA-2组细胞凋亡指数依次为(2.5±0.3)%