目的:探究泛素结合酶10(UbcH10)对三阴性乳腺癌自噬的调节作用及其作用机制。方法:在人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中，利用小干扰RNA(siRNA)进行瞬时转染低表达UBCH10基因，转染阴性对照siRNA的细胞作为阴性对照组，未经处理的细胞作为空白对照组。通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后UbcH10的表达。MDA-MB-231细胞的增殖情况及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的表达情况分别用细胞增殖试验(CCK-8)法及Western blot法检测。组间差异采用单因素方差分析和 t检验。 结果:RT-qPCR和Western blot实验结果显示，转染后siUbcH10-1组和siUbcH10-2组UbcH10的mRNA和蛋白的表达水平低于阴性对照组，差异有统计学意义(0.182±0.138比0.917±0.031、0.127±0.136比0.917±0.031， t＝9.191、9.876， P<0.001)、(0.430±0.245比0.430±0.245、0.434±0.093比0.434±0.093， t＝3.685、3.651， P<0.05)，证明低表达细胞株构建成功。CCK-8结果显示，siUbcH10-1组和siUbcH10-2组细胞12、24、48 h的吸光度值均低于阴性对照组(0.160±0.004比0.211±0.004、0.155±0.003比0.211±0.004、0.2

作者：芦梓楠；宋佳；孙刚

来源：中华实验外科杂志 2021 年 38卷 4期