目的:观察长链非编码RNA Crnde通过调节Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对小鼠成骨细胞增殖的影响。方法:培养MC3T3-E1成骨细胞，随后诱导分化3周，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Crnde表达，应用CRISPR-Cas9方法构建Crnde基因敲除小鼠模型，同时以野生型小鼠作为对照，分为Crnde基因敲除小鼠组( n＝25)和野生型小鼠组( n＝25)，小鼠处死前12 h腹腔注射BrdU进行染色观察成骨细胞增殖，检测血清1型前胶原N末端(P1NP)和Ⅰ型胶原羧基端交联肽(CTX-Ⅰ)表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织Wnt和β-catenin蛋白表达，原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况，分别运用Osteomeasure系统和MicroCT分析进行骨组织形态计量分析，双荧光素酶报告基因验证Crnde与Wnt蛋白的靶向调节关系。组间比较采用 t检验。 结果:成骨细胞分化过程Crnde表达情况为在诱导的3周时间内，随着时间延长，Crnde表达明显增加，在第3周表达最高( P>0.05)；Wnt和β-catenin在Crnde -/-小鼠和正常小鼠中表达情况中，蛋白质印迹法(Western blot)结果显示，Crnde -/-组中Wnt和β-catenin蛋白表达低于WT小鼠组( P<0.05)；BrdU免疫荧光染色结果显示，正常对照组小

作者：孙新志；廖鹰；郭俊杰；姬延辉；刘宏建

来源：中华实验外科杂志 2021 年 38卷 4期