目的:探讨磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞焦亡的作用及其机制。方法:建立睾丸GC-1细胞(美国ATCC细胞库)缺氧复氧模型,采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同复氧损伤时间点PTEN的表达变化;分别采用免疫荧光实验、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染PTEN后对GC-1细胞焦亡相关蛋白NLRP3和Caspase-1表达水平的影响。组间比较采用
t检验,多组间比较采用单因素方差分析。
结果:对照组及缺氧复氧组(0、6、12、24 h)PTEN的mRNA表达水平分别为(1.00±0.21、3.48±0.35、3.75±0.38、4.25±0.40、4.06±0.37)。与未缺氧GC-1细胞的对照组比较,随着复氧损伤时间的增加,PTEN表达明显增高,并在复氧12 h达到峰值(
F=43.21,
P<0.05)。Western blot结果显示,缺氧复氧组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.52±0.04、0.41±0.04)高于对照组(0.24±0.03、0.20±0.03,
t=9.700,
P<0.05;
t=7.275,
P<0.05)。过表达PTEN组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.75±0.06、0.62±0.05)高于其对照组(0.53±0.04、0.42±0.03)明显(
t=5.284,
P<0.05;
t=5.941,
P<0.05)。沉默PTEN组中NLRP3和Caspase-1
作者:宁金卓;何凯翔;许立哲;蒋焜
来源:中华实验外科杂志 2022 年 39卷 6期