目的:探索高糖培养下内皮细胞c-Casitas B谱系淋巴瘤原癌基因蛋白(c-Cbl)表达与活性变化对其成管的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别以5.5 mmol/L正常浓度葡萄糖(NG)、15.2 mmol/L中等浓度葡萄糖(MG)和25.0 mmol/L高浓度葡萄糖(HG)的培养基处理24 h,采用锁核酸修饰的反义寡核苷酸间隔物(LNA Gapmers)下调c-Cbl表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测c-Cbl表达及磷酸化水平。侵袭小室(Transwell)、细胞计数试剂盒(CCK-8)试验检测细胞迁移、增殖能力,成管实验判断细胞的成管能力,并通过
t检验评估两组间差异。
结果:HG组细胞c-Cbl在Y731位点的相对磷酸化水高于NG组(3.27±0.18比1.00±0.19,
t=15.140,
P<0.01),HG组细胞迁移数低于NG组[(38.33±6.51)个比(180.67±16.17)个,
t=-14.147,
P<0.01],HG组CCK-8吸光度值低于NG组(0.45±0.05比1.25±0.05,
t=-19.596,
P<0.01),HG组细胞成管水平低于NG组[相对总长度(0.42±0.08)比(1.00±0.11);相对结节数(0.36±0.07)比(1.00±0.07);相对网眼结构(0.32±0.08)比(1.00±0.10);
t=-7.119、-10.870、-9.114,
P<0.01]。另外,高糖下调c-Cbl(HG+c-Cbl KD)组CCK-8吸光度值高于
作者:谌程程;李余杰;黄宇婧;陈爱军
来源:中华实验外科杂志 2022 年 39卷 6期