目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52
作者：周安宇；张宏；梁秀彬；侯平；王海燕
来源：中华肾脏病杂志 2002 年 18卷 2期
