目的 构建钠依赖的葡萄糖转运蛋白2(SGLT2)基因异源表达体系，为探讨突变引起SGLT2蛋白功能及表达异常的分子机制提供实验依据。方法 利用RT-PCR法从人肾组织中获得SGLT2基因，将该基因克隆到真核表达载体PEXL-GFP(绿色荧光蛋白)中，将携带有SGLT2基因的PEXL载体转染人胚肾细胞系(HEK293细胞)，获得目的蛋白的瞬时表达。应用Western印迹及激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在HEK293细胞的表达和分布，并通过摄取实验进一步验证SGLT2蛋白的转运功能。结果 SGLT2-GFP蛋白可在HEK293细胞表达，激光共聚焦显微镜观察发现，SGLT2-GFP蛋白在细胞膜上呈点状分布，并且与细胞膜标记物(DiI)有良好的共定位，转染SGLT2-GFP质粒的HEK293细胞的转运活性较对照组(未转染及转染空质粒细胞组)强约3.5倍(P＜0.01)。结论成功构建了SGLT2真核表达载体，为探讨SGLT2基因表达、功能及SGLT2突变在家族性肾性糖尿发病的遗传机制提供了重要的依据。
作者：于磊；周绪杰；吕继成；丁嘉祥；朱厉；张宏
来源：中华肾脏病杂志 2011 年 27卷 8期
