目的 通过Notch信号途径抑制剂DAPT构建Notch信号敲除模型,探讨Notch信号通路在骨髓间质干细胞(BMSCs)体外分化为胰岛样细胞中的作用.方法 体外分离培养BMSCs并鉴定,体外诱导其分化.用γ-分泌酶特异性抑制剂DAPT阻断Notch信号通路.采用双硫腙(DTZ)染色法鉴定胰岛细胞;间接免疫荧光染色,RT-PCR和Western印迹等方法检测诱导后细胞的胰岛素、胰高血糖素、胰十二指肠同源框1基因(Pdx-1)和神经元素3(Ngn3)的表达.ELISA法检测细胞葡萄糖刺激后分泌胰岛素水平.结果 (1)BMSCs鉴定:间接免疫荧光染色结果显示:BMSCs表达CD59和CD90抗原,体外可表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等神经细胞标记物,证实其具多向分化潜能.(2)MTT结果显示:γ-分泌酶抑制剂(DAPT)可抑制BMSCs增殖,其效应有时间和剂量依赖性.并以剂量和时间依赖性方式抑制Notch信号通路靶基因Hes1的表达.用1、5、20 μmol DAPT处理96 h后细胞的Hes1表达分别为对照组的92.06％、71.40％、46.89％,提示其对Notch信号通路阻断率分别达到7.94％、28.6％和53.11％(均P＜0.05).(3)间接免疫荧光结果显示:DAPT阻断组的胰岛素和胰高血糖素阳性细胞百分比较对照组明显增多[分别为(74.03±3.96)％比(36.49±3.24)％;(64.81±4.37)％比(37.50
作者：张一婷；尹爱平；李利利；孙吉平
来源：中华肾脏病杂志 2014 年 30卷 8期
