目的 体外观察不同时间高糖刺激的人肾小球系膜细胞(HGMC)中细胞衰老和自噬的变化,及自噬增强剂西罗莫司和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3MA)对高糖作用的影响.方法 体外培养HGMC,分别给予高糖(30.0 mmol/L葡萄糖)刺激12、24、48、72 h,及以500 nmol/L西罗莫司和2 mmol/L 3MA干预高糖培养72 h.设正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇).应用光镜观察细胞形态改变,透射电镜观察自噬体形成并计数,β半乳糖苷酶活性染色检测衰老细胞,Western印迹检测自噬相关蛋白LC3、p62及衰老相关蛋白p53、p21的表达.结果 与正常对照组比较,高糖组随着刺激时间延长逐渐表现出细胞体积变大、细胞质区域扁平、多形核及双核细胞增多等一系列细胞衰老表型,高糖刺激72 h时β半乳糖苷酶染色阳性率增加(P＜0.05);高糖刺激48 h和72 h时自噬小体数量均下降,LC3表达下降、p62、p53、p21蛋白表达升高(均P＜0.05).与高糖组比较,西罗莫司干预组LC3表达升高、p62、p53及p21表达下降,β半乳糖苷酶染色阳性率减少(均P＜ 0.05);而3MA干预组以上效应均无明显改变(均P＞0.05).结论 高糖体外刺激通过抑制自噬活性和激活p53/p21信号通路,可诱导HGMC衰老.西罗莫司增强自噬活性,可以抑制p53/p21通路蛋白表达,减
作者：孙丹；杨爽；王力宁；刘林林；王秀颖；史劢；朱新旺；杜银科；孙达
来源：中华肾脏病杂志 2016 年 32卷 9期
