目的:探讨L型钙通道(L?type calcium channel ,LTCC)α1C、β3亚基在镁抑制高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法体外原代培养大鼠胸主动脉VSMC和血管环,用β?甘油磷酸盐(β?glycerophosphate ,β?GP)诱导钙化。将细胞、血管环分别分为4组培养7 d:正常对照组、高磷组(10 mmol/Lβ?GP)、镁干扰组(10 mmol/Lβ?GP+3 mmol/L MgSO4)、镁通道抑制剂(2?APB)组(10 mmol/Lβ?GP+3 mmol/L MgSO4+0.1 mmol/L 2?APB)。采用茜素红染色、硝酸银染色分别检测各组VSMC、血管环的钙盐沉积情况,且用邻甲酚酞络合酮比色法检测钙含量。反转录PCR、Western印迹检测VSMC中LTCCα1C、β3亚基,Runx2的基因和蛋白表达。免疫组织化检测各组血管环中Runx2蛋白表达。ELISA测定VSMC碱性磷酸酶(ALP)活性,荧光探针法测定细胞内钙离子浓度。结果与正常对照组比较,高磷组VSMC钙含量,ALP活性,LTCCα1C、LTCCβ3和Runx2 mRNA和蛋白的表达,胞内钙离子浓度均增加(均P<0.05);与高磷组比较,镁干扰组VSMC钙含量,ALP活性,LTCCα1C、LTCCβ3和Runx2 mRNA和蛋白的表达,钙离子浓度均降低(均P<0.05)。镁干扰组血管环组织钙含量和Runx2蛋白表达均低于高磷组(均P<0.05)。镁通道抑制剂组以上
作者:白亚玲;徐金升;袁景霞;张俊霞;崔立文;张胜雷
来源:中华肾脏病杂志 2016 年 32卷 10期