目的 探讨金属内肽酶OMA1对脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞线粒体碎裂和细胞凋亡的影响.方法 采用腹腔注射LPS的方法建立小鼠急性肾损伤模型,小鼠被分为野生型(WT)组和OMA1基因敲除型(OMA1 KO)组.检测小鼠Scr和BUN鉴定小鼠AKI模型成功与否.用TUNEL染色和半胱天冬酶3(Caspase 3)活性检测的方法判断肾脏组织中肾小管细胞凋亡改变.体外实验中,用OMA1 shRNA沉默人肾近曲小管细胞(HK2) OMA1基因,5μg/ml LPS处理细胞,DAPI染色和荧光分光光度计法检测细胞凋亡.通过共转染OMA1shRNA和mito-green质粒观测OMA1对细胞线粒体形态的影响,Western印迹法检测Cytochrome C释放和OMA1基因沉默效果.结果 LPS诱导后WT组Scr[(97.2_±26.5) μmol/L比(53.0±17.7) μmol/L]和BUN[(43.3±13.7) mmol/L比(29.7±7.7) mmol/L]均高于OMA1 KO组(均P< 0.05),且WT组小鼠肾小管细胞凋亡严重程度大于OMA1 KO组[(75.4±26.1)个/mm2比(38.3± 14.4)个/mm2,P< 0.05].转染OMA1 shRNA后抑制了HK2细胞内46%的OMA1蛋白表达(P<0.05),与对照组相比,LPS诱导后的OMA1 shRNA组HK2细胞线粒体碎裂减少[(29.8±10.9)%比(43.2±6.8)%,P< 0.05];Cytochrome C的释放减少[(37.0±12.3)%比(76.0±26.2)%,P<0.05];凋亡细胞个数减少[(13.2±3.9)
作者:肖潇;罗振钊;孔曼;卢忠心
来源:中华肾脏病杂志 2017 年 33卷 4期