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对用单抗5C5和单抗5C5-G1的混合物从3D5细胞λgtll cDNA文库筛选到的7个阳性cDNA克隆中的1个(3D5-5)进行了核苷酸序列分析。由于3D5-5 cDNA长1.6kb左右,不能直接测序,故先依测序用质粒pBScript-KS多克隆位点中的内切酶点行单酶切,经电泳分析画出测序用的物理图谱,再用相应内切酶行单酶酶切。藉低熔点琼脂糖回收各个片段。带质粒pBScript-KS的大片段经直接自身环化,小片段与质粒载体pBScript-KS重组,构建测序用的亚克隆。用双链双脱氧末端终止法测各亚克隆的核苷酸序列,再拚接出全长为1529bp的3D5-5 cDNA全长序列。与国际基因库资料比较,未见有相同的序列。此cDNA中有一个长465bp(从540bp~1004bp)的ORF,编码154个氨基酸的蛋白质。此蛋白质中有二个疏水区(第1~34位氨基酸及第79~109位氨基酸),提示它可能属Ⅰ类穿膜蛋白。

作者:石伟;朱立平;崔莲仙;张立新;张淑珍;王汛;李国燕

来源: 1996 年 16卷 6期

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作者:
石伟;朱立平;崔莲仙;张立新;张淑珍;王汛;李国燕
来源:
1996 年 16卷 6期
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cDNA DNA序列测定 开放阅读框架
对用单抗5C5和单抗5C5-G1的混合物从3D5细胞λgtll cDNA文库筛选到的7个阳性cDNA克隆中的1个(3D5-5)进行了核苷酸序列分析。由于3D5-5 cDNA长1.6kb左右,不能直接测序,故先依测序用质粒pBScript-KS多克隆位点中的内切酶点行单酶切,经电泳分析画出测序用的物理图谱,再用相应内切酶行单酶酶切。藉低熔点琼脂糖回收各个片段。带质粒pBScript-KS的大片段经直接自身环化,小片段与质粒载体pBScript-KS重组,构建测序用的亚克隆。用双链双脱氧末端终止法测各亚克隆的核苷酸序列,再拚接出全长为1529bp的3D5-5 cDNA全长序列。与国际基因库资料比较,未见有相同的序列。此cDNA中有一个长465bp(从540bp~1004bp)的ORF,编码154个氨基酸的蛋白质。此蛋白质中有二个疏水区(第1~34位氨基酸及第79~109位氨基酸),提示它可能属Ⅰ类穿膜蛋白。