目的通过链替换技术对一株人源性抗角蛋白Fab单抗进行体外亲和力成熟。方法分离、扩增多样性人免疫球蛋白轻链基因和IgG/IgM重链Fd段基因,分别构建轻链库和重链库。先以原始克隆的重链与轻链库随机搭配进行轻链替换,对形成的换链库采用解离速率筛选法(off-rate selection)选取亲和力提高的克隆;然后再将获得的轻链基因与重链库基因重组进行重链替换,筛选亲和力进一步提高的克隆并进行亲和力测定、可变区基因序列分析等一系列鉴定。结果替换轻链后所获抗体的亲和力提高到原来的10倍;替换重链后亲和力进一步提高达到7.9×1010/mol/L,是原始克隆的近23倍。结论链替换技术是提高抗体库中所获Fab抗体亲和力的有效手段。
作者:王刚;刘玉峰;王琰;化冰;乔媛媛
来源:中华微生物学和免疫学杂志 2001 年 21卷 2期