目的构建人高迁移率族蛋白1(HMGB1)编码基因的表达载体,获得纯化的重组蛋白,研究其生物学功能. 方法通过RT-PCR方法扩增出人HMGB1的编码基因,克隆于载体pGEM-T easy,再亚克隆于表达载体pGEX4T-2,经IPTG诱导可表达相对分子质量(Mr)约56×103的融合蛋白GST-HMGB1.经用GSTrap FF蛋白纯化柱和凝血酶行柱上酶切,得到纯化的重组蛋白HMGB1,用培养的人单核细胞系THP1检测蛋白活性. 结果构建了融合蛋白GST-HMGB1的重组表达质粒,获得了Mr约为30×103的纯化蛋白产物.该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α,并能明显诱导THP1细胞的凋亡. 结论获得了纯化的人HMGB1原核表达产物,对研究其在脓毒症中的生物学功能具有重要的意义.
作者：别良峰；于文彬；程晓东；苏明权；岳乔红
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2003 年 23卷 11期
