目的 采用逆转录结合实时荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异甄别单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,简称单增李氏菌)死活状态的定量方法.方法 根据单增李氏菌hlyA基因序列设计引物和探针;对实时荧光PCR反应体系进行优化后,提取菌体mRNA,通过随机引物进行逆转录反应;产生的cDNA通过实时荧光定量PCR进行鉴定.进一步评价逆转录结合实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对20份模拟双盲样本进行检测.结果 本实验所建立的逆转录结合实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测单增李氏菌,其他菌株和失活的单增李氏菌均无阳性结果出现;该方法检测纯菌和模拟样本的灵敏度分别可达到10 CFU/ml和1000CFU/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5
作者：金大智；曹际娟；张政；谢明杰；朱水荣
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2008 年 28卷 10期
