目的探讨转录因子Sp1在肿瘤坏死因子( TNF-α)上调人肾小球系膜细胞( HMCs ) IP3R1表达中的作用,进一步阐明肝肾综合征( HRS)肾小球滤过率( GFR)下降的分子机制。方法用实时定量PCR和免疫印迹检测TNF-α刺激HMCs后,IP3R1 mRNA、IP3R1蛋白及Sp1蛋白表达的情况,重组质粒PGL3-IP3R1 promoter瞬时转染HMCs,应用荧光素酶报告基因检测TNF-α对IP3R1启动子活性的影响;应用Sp1和DNA结合抑制剂光辉霉素( Mithramycin A )及Sp1-siRNA质粒瞬时转染预处理HMCs后,检测IP3R1蛋白表达的变化。此外,免疫印迹法检测肿瘤坏死因子受体( TNFR)对Sp1的活化及IP3R1蛋白表达的影响。结果 TNF-α作用HMCs后,IP3R1 mRNA、IP3R1蛋白和Sp1蛋白表达均明显增加,TNF-α显著增强IP3R1基因启动子的活性,Mithramycin A呈剂量依赖性阻断TNF-α诱导IP3R1蛋白表达上调,Sp1-siRNA预处理HMCs后,IP3R1蛋白表达明显下降。 TNFR1抗体+TNF-α组和TNFR2抗体+TNF-α组,IP3R1蛋白表达均有不同程度的下降。 TNFR1抗体+TNF-α组Sp1蛋白表达明显下降,而TNFR2抗体+TNF-α组,Sp1蛋白表达无明显变化。结论 TNF-α能上调人系膜细胞IP3R1的表达,TNF-α可能通过TNFR1/Sp1上调IP3R1的表达。
作者:王育蓉;李艳艳;卢仁隆;孙辉
来源:中华微生物学和免疫学杂志 2014 年 7期