目的 探讨在悬浮MDCK细胞中培养H7N9禽流感病毒时最佳的TPCK胰酶添加量.方法 在细胞生长期和产毒期,添加不同浓度的TPCK胰酶,每12 h取样监测其对细胞生长的数量、活率、葡萄糖和乳酸的代谢以及血凝滴度的影响,并对TPCK胰酶的批间差异做一探索.细胞生长期胰酶的添加量为0、1、2、4、6、8、10、15μg/ml;产毒期胰酶的添加量为0、0.5、1、1.5、2、2.5μg/ml.出现血凝滴度同等情况时,以MOI为0.001、0.005、0.025、0.05再次进行优化.结果 未见TPCK胰酶浓度对细胞数量、活率、葡萄糖和乳酸代谢明显的线性影响;在TPCK胰酶浓度高达15μg/ml时,也未见其对细胞生长的毒性.接种H7N9禽流感病毒后,1、1.5、2、2.5μg/ml的胰酶添加在48 h都达到了最高的滴度,为1:26.5,在60 h,后两种添加浓度的血凝滴度下降快于前两种添加浓度;MOI为0.005时,1.5μg/ml的胰酶添加在48 h产生的血凝滴度26.5高于同等条件下1μg/ml的26的血凝滴度.在TPCK胰酶不同批次中,有批间差异的存在.结论 1μg/ml和1.5μg/ml的胰酶添加可更好地促进H7N9禽流感病毒增殖,但1.5μg/ml的添加有更广谱的MOI适用性.
作者：孟子延；张家友；刘琛；张哲罡；邱冉；罗丹；施金荣；赵巍；夏志武；杨晓明
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2019 年 39卷 11期
