目的:确定肺炎链球菌β-内酰胺抗生素耐药相关胞内应答调节蛋白CiaR能与跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶StkP结合组成StkP/CiaR二元信号传导系统(TCSS)。方法:采用PCR扩增
stkP基因胞内区片段(IC-
stkP)，T-A克隆测序确认序列正确后构建其原核表达系统。SDS-PAGE检查IC-
stkP片段和我们以往构建的
ciaR基因原核表达系统目的重组蛋白rIC-StkP和rCiaR表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯rIC-StkP和rCiaR。采用Co-IP和LC-MS/MS鉴定rIC-StkP捕获的肺炎链球菌靶蛋白。采用等离子共振法(SPR)和等温滴定量热法(ITC)检测rCiaR与rIC-StkP结合能力。
结果:所构建的IC-
stkP片段原核表达系统能有效表达rIC-StkP。SDS-PAGE结果显示提纯的rIC-StkP和rCiaR在胶上均为单一蛋白质条带。CiaR可与rIC-StkP特异性共沉淀，其3个裂解肽位于CiaR分子内且序列完全相符。SPR和ITC结果显示，rCiaR与rIC-StkP呈高亲和力强结合，其
KD值分别为1.526×10
－9 mol/L和1.980×10
－6 mol/L。
结论:肺炎链球菌CiaR可作为StkP激酶下游应答调节蛋白组成StkP/CiaR-TCSS。
作者：龙聪；黄燕颖；周洋；严杰；孙爱华
来源：中华微生物学和免疫学杂志 2020 年 40卷 6期
