目的 研究异源(猪)基因α1,3半乳糖转移酶(3GT)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因形成的融合蛋白对其荧光表达量的影响.方法 BamHI,EcoRI酶切pcDNA3.1-α1,3GT重组载体后,回收含α1,3GT的片段,与BamHI、EcoRI酶切回收的pEGFP-N1载体连接,并酶切、测序鉴定重组真核表达载体pEGFP/α1,3GT.将该表达载体转染人肺癌细胞A549、人胚肾细胞293FT,EGFP的表达用荧光显微镜观察和流式细胞仪进行荧光定量分析.结果 pEGFP-N1载体转染A549和293FT后48 h的转染阳性率分别80.5％和86.5％；pEGFP/α1,3GT载体转染A549和293FT细胞后48 h的转染效率则为75.8％和81.2％.A549细胞空白对照,转染pEGFP-N1和pEGFP/α1,3GT载体的A549细胞平均荧光强度分别为1.21、0.956;293FT细胞空白对照,pEGFP-N1和pEGFP/α1,3GT载体的293FT细胞平均荧光表达量分别为7.66、1.00.结论 pEGFP/α1,3GT融合蛋白的生成抑制了绿色荧光蛋白的表达强度.
作者：唐晶；谢柏臻；李鹏飞；姚琴；赵涣阁；卓慧钦；刘祖国；赵永祥
来源：中华细胞与干细胞杂志（电子版） 2011 年 01卷 2期
