目的利用AdEasy系统构建人肝细胞生长因子(HGF)复制缺陷型重组腺病毒(AdHGF),并观察其对人胎肝细胞细胞周期的影响.方法将质粒pUCHGF扩增、酶切获得人HGF cDNA片段,插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-HGF,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAdHGF,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdHGF;将AdHGF体外感染人胎肝细胞,以RT-PCR检测HGF在胎肝细胞的表达;同时通过流式细胞仪测定AdHGF对胎肝细胞细胞周期的作用.结果连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAdHGF;经293细胞包装,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得约4×1010efu/ml滴度的重组病毒;AdHGF体外感染人胎肝细胞3d后,HGF表达明显增加,流式细胞仪检测结果显示感染后的胎肝细胞由G0/G1期向S期和G2/M期转化.结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和HGF的重组腺病毒Ad-HGF;AdHGF体外感染胎肝细胞可显著提高HGF的表达并促进肝细胞增殖,这将为肝细胞移植和基因治疗肝纤维化提供新的手段.
作者：林勇；谢渭芬；张忠兵；张新；陈伟忠；陈岳祥；张兴荣；程志红
来源：中华消化杂志 2003 年 23卷 6期
