目的：了解沉默信息调节因子1（SIRT1）在胆管癌细胞中的表达水平，探讨其对胆管癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法采用实时定量 PCR 和 Western 印迹法比较人胆管癌细胞QBC939和 HuCCT1与正常胆管上皮细胞 HIBEpiC 中 SIRT1 mRNA 和蛋白的表达。将 QBC939和HuCCT1分成阴性对照组、转染序列1组和转染序列2组，分别转染阴性对照小干扰 RNA 、针对 SIRT1的小干扰 RNA 序列1和小干扰 RNA 序列2，采用实时定量 PCR 和 Western 印迹法鉴定干扰效果。转染后应用细胞计数试剂盒和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。采用 Western 印迹法检测凋亡相关蛋白生存素、B 细胞淋巴瘤‐2基因相关 X 蛋白（Bax）基因、剪切型多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP），以及上皮标志物上皮型钙黏蛋白和间质标志物神经型钙黏蛋白、波形蛋白的表达情况。统计学处理采用 t 检验。结果胆管癌细胞 QBC939和 HuCCT1中 SIRT1的 mRNA 表达水平分别比正常胆管上皮细胞 HIBEpiC 升高（3．30±0．43）和（4．55±0．50）倍，差异均有统计学意义（t ＝7．29、9．79，P 均＜0．05）；胆管癌细胞中SIRT1的蛋白表达水平升高与 mRNA 相似。转染 SIRT1小干扰 RNA 后，
作者：廖婉玉；张斌；方诚；杨燕；张舒；丁希伟；邹晓平
来源：中华消化杂志 2015 年 8期
