目的观察反义人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是否能够抑制端粒酶活性及K562细胞的增殖.方法选择hTERT基因上游部分的起始密码子上下290 bp长度的核苷酸片段,设计引物并进行PCR扩增后,反向连接于pLNCX-neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒.在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K562细胞.以MTT法和体外集落形成实验检测反义hTERT表达质粒对K562细胞增殖的抑制作用;以TRAP-PCR ELISA法来研究反义hTERT基因对K562细胞的端粒酶活性的抑制作用.结果①转染反义hTERT表达质粒组与对照组(空白对照及空质粒组)相比较,生长速度明显变慢,集落形成能力明显下降,空白对照组K562细胞集落数为(100.33±7.57)/103细胞,空质粒组K562neo细胞集落数为(92.67±5.86)/103细胞,转染反义质粒组HL-60as集落数为(50.33±6.11)/103细胞(P<0.01);②反义hTERT对K562细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用,K562neo细胞活性为1.279±0.073,K562as为0.826±0.036,两者比较,差异有显著性(P<0.01).结论该研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K562细胞中后,能够封闭K562细胞hTERT mRNA的表达,在抑制端粒酶活性的同时,减慢了K562细胞的生长速度,并抑制了体外细胞克隆形成能力.

作者：孟秀香；苏本利；贾莉；孙宏丹；张卓然

来源：中华血液学杂志 2003 年 24卷 5期