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目的 观察探讨音猬因子(Shh)信号转导通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用.方法 hRPE-19细胞分为正常对照组(Cont组)、缺氧组.缺氧组加入100μmol/L CoCl2再分为缺氧对照组(CoCl2组)、cyclopamine处理组(CYA组)、二甲基亚砜对照组(DMSO组).CYA组于造成缺氧前1h加入20μmol/L的cyclopamine进行预处理;DMSO组加入1‰DMSO.各组细胞培养4、8、12、24 h.采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞内Shh、VEGF mRNA的表达;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF蛋白含量.结果 RT-PCT检测结果显示,缺氧刺激4、8、12、24 h,缺氧组细胞内Shh、VEGF mRNA表达逐渐增高,与Cont组细胞内Shh(F=45.260)、VEGF mRNA(F=264.938)表达比较,差异有统计学意义(P=0.001).CYA组细胞内Shh、VEGF mRNA表达与CoCl2组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);DMSO组细胞内Shh、VEGF mRNA表达与CoCl2组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).ELISA检测结果显示,CoCl2组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量与Cont组比较,差异有统计学意义(F=3 156.676,P=0.001).CYA组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量较CoCl2组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Shh信号转导通路可能参与了缺氧引起的hRPE细胞中V

作者:侯亚南;雷宁玉;宋斌;王丽君

来源:中华眼底病杂志 2016 年 32卷 1期

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作者:
侯亚南;雷宁玉;宋斌;王丽君
来源:
中华眼底病杂志 2016 年 32卷 1期
标签:
血管内皮生长因子类 视网膜色素上皮 细胞,培养的 Vascular endothelial growth factors Retinal pigment epithelium Cells,cultured
目的 观察探讨音猬因子(Shh)信号转导通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮(hRPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达中的作用.方法 hRPE-19细胞分为正常对照组(Cont组)、缺氧组.缺氧组加入100μmol/L CoCl2再分为缺氧对照组(CoCl2组)、cyclopamine处理组(CYA组)、二甲基亚砜对照组(DMSO组).CYA组于造成缺氧前1h加入20μmol/L的cyclopamine进行预处理;DMSO组加入1‰DMSO.各组细胞培养4、8、12、24 h.采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞内Shh、VEGF mRNA的表达;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF蛋白含量.结果 RT-PCT检测结果显示,缺氧刺激4、8、12、24 h,缺氧组细胞内Shh、VEGF mRNA表达逐渐增高,与Cont组细胞内Shh(F=45.260)、VEGF mRNA(F=264.938)表达比较,差异有统计学意义(P=0.001).CYA组细胞内Shh、VEGF mRNA表达与CoCl2组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);DMSO组细胞内Shh、VEGF mRNA表达与CoCl2组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).ELISA检测结果显示,CoCl2组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量与Cont组比较,差异有统计学意义(F=3 156.676,P=0.001).CYA组细胞培养上清液中VEGF蛋白含量较CoCl2组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 Shh信号转导通路可能参与了缺氧引起的hRPE细胞中V