目的 观察氧化应激对人视网膜色素上皮(RPE)细胞紧密连接屏障功能及紧密连接蛋白occludin、claudin-1 ～4表达水平的影响.方法 实验研究.培养人RPE细胞株D407,分为H202处理组和H2O2未处理组(对照组).MTT法观察不同浓度H2O2对D407细胞活性的影响；分别应用经上皮电阻(TER)和荧光素钠渗透实验检测低浓度H2O2作用24h和72 h后RPE紧密连接屏障功能的变化；通过实时荧光定量PCR法和免疫印迹法分别从mRNA和蛋白水平检测H2O2作用24h后对紧密连接蛋白occludin 、claudin-1 ～4表达水平的影响.采用t检验统计分析TER、荧光素钠渗透实验、实时荧光定量PCR法、免疫印迹法的检测结果,采用单因素方差分析统计分析细胞活力结果.结果 H2O2≤0.4 mmol/L时,处理24h对RPE细胞的活力无明显影响.选择0.2 mmol/L为后序试验的浓度.D407细胞培养8d后,TER达到稳定状态.0.2 mmol/L H2O2作用3h后TER开始下降,至12 h出现明显差异(18.62±1.89比24.11±0.96,t=4.490,P=0.013),24h接近最大效应(11.86±1.19比24.13±1.26,t=12.260,P=0.000),维持至72 h(11.56±1.47比24.33±1.52,t=10.460,p=0.000).H2O2处理D407细胞24 h后加入荧光素钠,不同时间点处理组的荧光渗透百分比均高于对照组(20 min:25％±3％比12％±4％,t=-4.50,P=0.011；40

作者：柏凌；闫欢欢；张德秀；王建明；孙乃学

来源：中华眼科杂志 2012 年 48卷 5期