目的 探讨乙型肝炎病毒X基因(HBx)转染人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞后对其表达Notch1信号的影响,并观察Notch1信号在HBx介导的肾小管上皮细胞免疫活性中的作用.方法 用分子克隆的方法构建pcDNA3.1/myc-HBx质粒及pcDNA3.1/myc-Notch1质粒,转染HK-2细胞,并应用短发卡RNA(shRNA)沉默Notch1基因表达.将细胞分为7组:①正常培养组；②转染HBx空载质粒组；③转染HBx质粒组；④转染HBx质粒+Notch1空载质粒组；⑤转染HBx质粒+Notch1质粒组；⑥转染HBx质粒+Notch1 shRNA空载质粒组；⑦转染HBx质粒+Notch1 shRNA沉默质粒组.实时定量PCR和蛋白印迹法检测细胞中Notch1受体的变化,流式细胞术检测细胞表面人主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ、CD40表达的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)4、干扰素(IFN)-γ水平.结果 HK-2细胞经转染HBx基因后,可高表达HBx,Notch1shRNA在HK-2细胞中的转染效率也高达70％,基因沉默有效；转染HBx基因组细胞Notch1水平高于正常培养组及转染HBx空载质粒组相比,且Notch1过表达组细胞表面MHC-Ⅱ、CD40表达均明显高于Notch1空载质粒组(9.69％±0.52％比4.90％±0.32％,21.56％ ±0.71％比15.74％±0.20％,均P ＜0.05),其上清液中IL-4水平亦高于Notch1空载质粒组(50.

作者：王轩；周益；袁伟杰；尚明花；包谨芳；朱楠

来源：中华医学杂志 2013 年 93卷 24期