目的 探讨钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的气道黏液高分泌中的作用.方法 通过缺氧培养箱(94％ N2、1％ O2、5％ CO2、37℃)培养人气道上皮细胞HBE16的方法复制细胞缺氧模型.转染CaSR的小干扰RNA (siRNA)及预先给予CaSR特异性激动剂CaCl2、磷脂酶C信号通路不同的抑制剂:Gαq/11蛋白特异性抑制剂(YM-254890),磷脂酶C特异性抑制剂(U73122),三磷酸肌醇受体(IP3R)特异性抑制剂(2-APB)及细胞内Ca2+螯合剂(BAPTA-AM)后,各组细胞再施以缺氧处理.采用反转录-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC mRNA的转录水平,Western印迹法检测CaSR蛋白的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测MUC5AC蛋白的相对含量,共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+浓度的变化.结果 缺氧组CaSR蛋白相对表达水平(0.423 ±0.028)显著高于对照组(0.185 ±0.036)(t=12.75,P＜0.001);细胞内Ca2+浓度、MUC5AC蛋白相对含量及MUC5AC mRNA相对表达水平[(154.2±11.4) nmol/L、(0.624±0.063) μg/L、0.736±0.045]也显著高于对照组[(67.5±2.8)nmol/L、(0.257 ±0.051)tμg/L、0.321±0.034](t=18.04、11.06、18.05,均JP＜0.001).CaCl2能上调缺氧引起的上述作用,转染CaSR siRNA能够下调缺氧引起的上述效应(均P＜0.001).预先给予YM-254890、U73122、2-APB、BAPTA-AM处理细胞,细

作者：杨红菊；尤列·皮尔曼；维克多·科罗索夫；周向东

来源：中华医学杂志 2014 年 94卷 12期